Ang pag-aaral ng bacteria ay may malaking praktikal na kahalagahan para sa mga tao. Sa ngayon, ang isang malaking bilang ng mga prokaryote ay natuklasan, na naiiba sa bawat isa sa pathogenicity, lugar ng pamamahagi, hugis, sukat, bilang ng flagella, at iba pang mga parameter. Para pag-aralan nang detalyado ang strain na ito, ginagamit ang isang bacteriological research method.
Ano ang mga paraan para sa pagsusuri ng mga bacterial cell?
Upang matukoy kung pathogenic ang bacteria, sinusuri ang kultura sa iba't ibang paraan. Kabilang sa mga ito:
1. Bacterioscopic na paraan.
2. Bacteriological method.
3. Biyolohikal na pamamaraan.
Bacterioscopic at bacteriological research method ay direktang nakabatay sa pagtatrabaho sa prokaryotic cells, kapag kinakailangan ang biological analysis upang pag-aralan ang epekto ng naturang mga cell sa buhay na organismo ng mga eksperimentong hayop. Ayon sa antas ng pagpapakita ng ilang mga palatandaan ng sakit, maaaring gawin ng siyentipikokonklusyon tungkol sa pagkakaroon o kawalan ng pathogenic bacteria sa sample, gayundin ang natural na pagpapalaganap ng mga ito sa katawan ng hayop upang makuha ang kanilang kultura at gamitin sa iba pang mga gawa.
Ang bacteriological na paraan ng pananaliksik ay naiiba sa bacterioscopic. Sa una, ang isang espesyal na inihandang kultura ng mga buhay na prokaryote ay ginagamit para sa pagsusuri, habang sa pangalawa, ang trabaho ay isinasagawa gamit ang mga patay o buhay na mga cell sa isang glass slide.
Mga yugto ng pamamaraan ng pananaliksik sa bacteriological. Microbiology
Ang prinsipyo ng pag-aaral ng mga katangian ng isang bacterial culture ay maaaring maging kapaki-pakinabang kapwa para sa mga microbiologist na nagtakda ng layunin ng pag-aaral ng mga prokaryotic cell, at para sa mga laboratoryo technician na ang gawain ay itatag ang pathogenicity o non-pathogenicity ng bacteria, at pagkatapos ay i-diagnose ang pasyente.
Ang paraan ng pag-aaral ng bacteria ay nahahati sa tatlong yugto:
1. Paghihiwalay ng bacteria mula sa orihinal na sample.
2. Paghahasik ng bacteria at pagpapalago ng purong kultura, pag-aaral ng mga katangian nito.
3. Detalyadong pag-aaral ng bacterial cell.
Unang yugto
Ang sample, o smear, ay kinuha mula sa libreng ibabaw ng medium o mula sa pasyente. Kaya, nakakakuha tayo ng "cocktail" ng maraming uri ng bacteria na dapat itanim sa isang nutrient medium. Minsan nagiging posible na agad na ihiwalay ang mga kinakailangang bakterya, alam ang kanilang foci ng pamamahagi sa katawan.
Pagkalipas ng dalawa o tatlong araw, pipiliin ang mga gustong kolonya atay nahasik sa solidong media ng mga pagkaing Petri sa tulong ng isang sterile loop. Maraming mga laboratoryo ang gumagana sa mga test tube, na maaaring maglaman ng solid o likidong nutrient media. Ito ay kung paano isinasagawa ang bacteriological method ng pananaliksik sa microbiology.
Ikalawang yugto
Pagkatapos makakuha ng mga indibidwal na kolonya ng bakterya, isang direktang macro- at microanalysis ang isinasagawa. Ang lahat ng mga parameter ng mga kolonya ay sinusukat, ang kulay at hugis ng bawat isa sa kanila ay tinutukoy. Karaniwang magbilang ng mga kolonya sa isang Petri dish at pagkatapos ay sa panimulang materyal. Mahalaga ito sa pagsusuri ng pathogenic bacteria, ang bilang nito ay depende sa antas ng sakit.
Bacteriological na paraan ng pananaliksik, ang ika-2 yugto nito ay ang pag-aaral ng mga indibidwal na kolonya ng mga microorganism, ay maaaring iugnay sa isang biological na pamamaraan para sa pagsusuri ng bakterya. Ang isa pang layunin ng pagtatrabaho sa yugtong ito ay upang madagdagan ang dami ng pinagmumulan ng materyal. Magagawa ito sa isang nutrient medium, o maaari kang magsagawa ng eksperimento sa vivo sa mga nabubuhay na eksperimentong organismo. Ang mga pathogen bacteria ay dadami, at bilang resulta, ang dugo ay maglalaman ng milyun-milyong prokaryotic cells. Madaling ihanda ang kinakailangang working material ng bacteria mula sa kinuhang dugo.
Ikatlong yugto
Ang pinakamahalagang bahagi ng pag-aaral ay ang pagtukoy ng morphological, biochemical, toxigenic at antigenic properties ng bacterial culture. Isinasagawa ang trabaho gamit ang mga pre-cleaned na kultura sa isang nutrient medium, gayundin sa mga paghahanda (madalas na nabahiran) sa ilalim ng mikroskopyo.
Itakda ang pagmamay-aripathogenic o oportunistikong bakterya sa isa o ibang sistematikong grupo, pati na rin upang matukoy ang kanilang paglaban sa mga gamot, ay nagbibigay-daan sa bacteriological na paraan ng pananaliksik. Stage 3 - antibiotics, ibig sabihin, pagsusuri ng pag-uugali ng mga bacterial cell sa mga kondisyon ng nilalaman ng mga gamot sa kapaligiran.
Ang pag-aaral ng antibiotic resistance ng isang kultura ay may malaking praktikal na kahalagahan kapag kinakailangan na magreseta ng kinakailangan, at higit sa lahat, mabisang gamot para sa isang partikular na pasyente. Dito makakatulong ang paraan ng pagsasaliksik ng bacteriological.
Ano ang growth medium?
Para sa pag-unlad at pagpaparami, ang bacteria ay dapat nasa pre-prepared nutrient media. Sa pagkakapare-pareho, maaari silang maging likido o solid, at ayon sa pinagmulan - gulay o hayop.
Mga pangunahing kinakailangan sa media:
1. Sterility.
2. Pinakamataas na transparency.
3. Mga pinakamainam na indicator ng acidity, osmotic pressure, aktibidad ng tubig at iba pang biological value.
Pagkuha ng mga hiwalay na kolonya
1. Paraan ng Drygalsky. Binubuo ito sa katotohanan na ang isang pahid na may iba't ibang uri ng mga microorganism ay inilapat sa bacterial loop. Ang loop na ito ay ipinapasa kasama ang unang Petri dish na may nutrient medium. Dagdag pa, nang hindi binabago ang loop, ang pamamaraan ng natitirang materyal ay isinasagawa sa pangalawa at pangatlong mga pagkaing Petri. Kaya, sa mga huling sample ng kolonya, ang bakterya ay hindi mapupunan ng masyadong makapal, sa gayon ay pinapasimple ang kakayahang makahanap ng mga kinakailangan para sa trabaho.bacteria.
2. Pamamaraan ng Koch. Gumagamit ito ng mga test tube na may molten nutrient medium. Ang isang loop o pipette na may pahid ng bakterya ay inilalagay doon, pagkatapos kung saan ang mga nilalaman ng test tube ay ibinuhos sa isang espesyal na plato. Ang agar (o gelatin) ay nagpapatigas pagkatapos ng ilang oras, at madaling mahanap ang nais na mga kolonya ng cell sa kapal nito. Mahalagang palabnawin ang pinaghalong bacteria sa mga test tube bago simulan ang trabaho upang hindi masyadong mataas ang konsentrasyon ng mga microorganism.
Ang bacteriological na pamamaraan ng pananaliksik, ang mga yugto nito ay batay sa paghihiwalay ng gustong kultura ng bakterya, ay hindi magagawa kung wala ang dalawang pamamaraang ito para sa paghahanap ng mga nakahiwalay na kolonya.
Antibiogram
Visually, ang reaksyon ng bacteria sa mga gamot ay makikita sa dalawang praktikal na paraan:
1. Paraan ng paper disc.
2. Nagpaparami ng bacteria at antibiotic sa isang likidong medium.
Ang paraan ng paper disc ay nangangailangan ng kultura ng mga mikroorganismo na lumaki sa solidong nutrient medium. Sa ganoong daluyan ay maglagay ng ilang piraso ng bilugan na papel na babad sa antibiotics. Kung ang gamot ay matagumpay na nakayanan ang neutralisasyon ng mga selula ng bakterya, pagkatapos ng naturang paggamot ay magkakaroon ng isang lugar na walang mga kolonya. Kung negatibo ang reaksyon sa antibiotic, mabubuhay ang bacteria.
Sa kaso ng paggamit ng likidong nutrient medium, maghanda muna ng ilang test tube na may kultura ng bacteria na may iba't ibang dilution. Ang mga antibiotic ay idinagdag sa mga test tube na ito, at ang proseso ng pakikipag-ugnayan sa pagitan ng sangkap at mga mikroorganismo ay sinusunod sa araw. Bilang isang resulta, ang isang mataas na kalidad na antibiogram ay nakuha, ayon sa kung saan posible nahatulan ang bisa ng gamot para sa isang partikular na pananim.
Mga pangunahing gawain ng pagsusuri
Dito nakalista ang mga layunin at yugto ng bacteriological na pamamaraan ng pananaliksik.
1. Kunin ang panimulang materyal na gagamitin upang ihiwalay ang mga kolonya ng bakterya. Maaari itong maging pahid mula sa ibabaw ng anumang bagay, mucous membrane o cavity ng organ ng tao, isang pagsusuri sa dugo.
2. Paglilinang ng kultura sa isang solidong nutrient medium. Pagkatapos ng 24-48 na oras, makikita ang mga kolonya ng iba't ibang uri ng bakterya sa Petri dish. Pinipili namin ang ninanais ayon sa pamantayang morphological at / o biochemical at nagsasagawa ng karagdagang gawain dito.
3. Pagpapalaganap ng nagresultang kultura. Ang pamamaraan ng pananaliksik na bacteriological ay maaaring batay sa isang mekanikal o biyolohikal na pamamaraan ng pagtaas ng bilang ng mga kultura ng bakterya. Sa unang kaso, ang trabaho ay isinasagawa gamit ang solid o likidong nutrient media, kung saan ang bakterya ay dumami sa isang termostat at bumubuo ng mga bagong kolonya. Ang biological na pamamaraan ay nangangailangan ng mga natural na kondisyon para sa pagtaas ng bilang ng mga bakterya, kaya dito ang eksperimentong hayop ay nahawahan ng mga microorganism. Pagkalipas ng ilang araw, maraming prokaryote ang makikita sa sample ng dugo o smear.
4. Paggawa gamit ang dalisay na kultura. Upang matukoy ang sistematikong posisyon ng bakterya, pati na rin ang kanilang pag-aari sa mga pathogen, kinakailangan na magsagawa ng masusing pagsusuri ng mga selula ayon sa mga katangian ng morphological at biochemical. Kapag nag-aaral ng mga pathogenic na grupo ng mga microorganism, mahalagang malamangaano kabisa ang mga antibiotic.
Ito ay isang pangkalahatang katangian ng bacteriological research method.
Mga tampok ng pagsusuri
Ang pangunahing tuntunin ng bacteriological research ay ang maximum sterility. Kung nagtatrabaho ka sa mga test tube, ang mga kultura at subculture ng bacteria ay dapat gawin lamang sa isang heated spirit lamp.
Ang lahat ng mga yugto ng pamamaraan ng pananaliksik sa bacteriological ay nangangailangan ng paggamit ng isang espesyal na loop o isang Pasteur pipette. Ang parehong mga tool ay dapat na pre-treat sa apoy ng isang alcohol lamp. Tulad ng para sa Pasteur pipette, dito, bago ang thermal sterilization, kailangang putulin ang dulo ng pipette gamit ang mga sipit.
Ang pamamaraan ng seeding bacteria ay mayroon ding sariling katangian. Una, kapag nag-inoculate sa solid media, isang bacterial loop ang ipinapasa sa ibabaw ng agar. Ang loop, siyempre, ay dapat na magkaroon ng isang sample ng mga microorganism sa ibabaw. Isinasagawa din ang inoculation sa culture medium, kung saan ang loop o pipette ay dapat umabot sa ilalim ng Petri dish.
Kapag nagtatrabaho sa likidong media, ginagamit ang mga test tube. Dito, mahalagang tiyakin na ang mga likido ay hindi dumadampi sa mga gilid ng mga babasagin sa laboratoryo o mga takip, at ang mga instrumentong ginamit (pipette, loop) ay hindi dumadampi sa mga banyagang bagay at ibabaw.
Ang kahalagahan ng biological research method
Ang pagsusuri sa sample ng bakterya ay may mga praktikal na aplikasyon nito. Pangunahinbacteriological research method ay maaaring gamitin sa medisina. Halimbawa, kinakailangan na pag-aralan ang microflora ng pasyente upang maitaguyod ang tamang diagnosis, pati na rin upang bumuo ng tamang kurso ng paggamot. Nakakatulong dito ang isang antibiogram, na magpapakita ng aktibidad ng mga gamot laban sa pathogen.
Ang pagsusuri ng bacteria ay ginagamit sa laboratoryo upang tuklasin ang mga mapanganib na sakit tulad ng tuberculosis, umuulit na lagnat o gonorrhea. Ginagamit din ito para pag-aralan ang bacterial composition ng tonsils, organ cavities.
Bacteriological research method ay maaaring gamitin upang matukoy ang kontaminasyon ng kapaligiran. Ayon sa data sa quantitative at qualitative na komposisyon ng isang smear mula sa ibabaw ng isang bagay, ang antas ng populasyon ng kapaligiran na ito sa pamamagitan ng mga microorganism ay tinutukoy.
