Colorimetric na paraan - isang pagsusuri batay sa paghahambing ng saturation ng kulay ng mga inimbestigahan at kilalang substance. Ang mga resulta ng pisikal at kemikal na pagsusuri ay may malaking halaga para sa maraming sangay ng agham, ngunit higit sa lahat ang pananaliksik ay ginagamit sa medisina.
Ang kakanyahan ng pamamaraang colorimetric
Maraming uri ng mga pagsubok na tumutukoy sa kemikal na komposisyon ng mga sangkap. Ang ilan sa mga ito ay pangkalahatan at malawakang ginagamit sa iba't ibang larangan, ang iba ay tiyak, na may mas mataas na katumpakan. Ang colorimetric na paraan ay pangkalahatan.
Ang kakanyahan ng pagsusuri ay nakasalalay sa katotohanan na ang saturation ng kulay ng isang solusyon na may hindi kilalang konsentrasyon ay inihahambing sa kulay ng isang karaniwang solusyon. Sa panahon ng pagsusuri, bilang isang resulta ng pakikipag-ugnayan ng inimbestigahan na bahagi sa isang tiyak na reagent, nabuo ang isang kulay na tambalan. Pagkatapos makumpleto ang reaksyon, ang nagreresultang lilim ay inihahambing sa kulay ng mga solusyon, ang konsentrasyon nito ay alam na.
Pinaniniwalaan na ang nagtatag ng colorimetry ay si Robert Boyle. Gumamit siya ng squeezetannins upang makilala ang bakal mula sa tanso sa solusyon. Si Boyle ang nakapansin na mas malaki ang konsentrasyon ng bakal sa solusyon, mas mayaman ang tono ng huli.
Colorimetry
Ang Colorimetry ay isang paraan para sa pagtukoy ng dami ng substance sa mga solusyon. Ang pagsusuri ay batay sa batas ng Bouguer-Lambert-Beer: kapag ang isang light beam ay tumama sa isang siksik na sumisipsip na layer ng isang substance, humihina ang intensity nito.
Ang colorimetric na paraan para sa pagtukoy ng konsentrasyon ng isang substance ay maaaring gumamit ng visual na paghahambing o paghahambing gamit ang mga espesyal na instrumento upang masukat ang intensity ng kulay. Ang paghahambing ay ginawa sa isang tuwiran at kabayarang paraan.
- Diretso. Ang pamamaraan ay nagsasangkot ng paghahambing ng antas ng kulay ng solusyon sa pagsubok sa isang tiyak na density at temperatura ng likido sa isang reference na solusyon. Kapag gumagamit ng mga photocolorimeter at spectrophotometer, ang distilled water ay ginagamit bilang isang reference na solusyon. Sinusukat ng mga device ang intensity ng agos, na nakadepende sa intensity ng liwanag.
- Compensatory. Ang pamamaraan ay batay sa pagdadala ng kulay ng pinag-aralan na sample sa sanggunian. Ang resulta ay makakamit sa pamamagitan ng pagdaragdag ng solvent o pagtaas ng taas ng layer ng stained medium.
Ang paggamit ng spectrophotometer, monochromator at iba pang mga instrumento sa katumpakan ay higit na pinapasimple ang dati nang simpleng paraan ng pananaliksik at nagbibigay-daan sa iyong pataasin ang katumpakan ng mga resulta. Nasusukat ng mga device na ito ang dami ng light transmission at natutukoy ang wavelength.
Kung saan inilalapat ang pagsusuri
Colorimetric na paraan ng pagsusuri ay ginagamit kapag ang eksaktong kemikal na komposisyon ay alam, mayroong isang reference sample para sa paghahambing, at ang temperatura ng pagsubok at reference sample ay pareho. Kung kailangan mong mabilis na matukoy ang dami ng may kulay na substance, ngunit napakaliit nito kaya imposibleng ilapat ang analytical method.
Ang Colorimetry ay malawakang ginagamit sa medisina para sa klinikal na biochemical na pananaliksik at iba pang mga lugar:
- industriya ng parmasyutiko;
- industriya ng pagkain at alkohol;
- agronomy (pagtukoy ng kalidad ng lupa).
Mga kalamangan at kahinaan
Ang colorimetric na paraan, tulad ng iba pa, ay may mga kalamangan at kahinaan.
Kabilang sa mga bentahe ang sumusunod:
- kadalian ng pagsusuri, minimum na mga pamamaraan sa paghahanda;
- posibilidad ng pagsubok kahit na may kaunting materyal sa pagsubok;
- hindi na kailangan ng mamahaling kagamitan, bagama't ang mga modernong kagamitan na hindi mura ay lalong ginagamit kamakailan. Ngunit nagbibigay sila ng pinakatumpak na resulta.
Mga disadvantage: mababang katumpakan ng pagsusuri kumpara sa mga analytical na pamamaraan.
Paraan ng biuret para sa pagtukoy ng protina
Ang Protein sa blood serum ay isang indicator na sumasalamin sa estado ng homeostasis. Ang pagtaas sa konsentrasyon ng isang macromolecular compound sa dugo ay tinatawag na hyperproteinemia, ang mababang nilalaman ay tinatawag na hypoproteinemia.
Mga protina saang serum ng dugo ay may iba't ibang komposisyon, istraktura, mga katangian, gumaganap ng iba't ibang mga pag-andar. Nahahati sila sa mga enzyme, hormone, immunoglobulin at iba pa. Ang lahat ng pangkat ng mga protina ay may ilang karaniwang katangian, batay sa kung aling mga pamamaraan ang binuo para sa pagtukoy ng mga macromolecular organic compound sa mga biological fluid.
Sa lahat ng mga pamamaraan sa klinikal na biochemistry, ang mga pamamaraang colorimetric para sa pagtukoy ng protina ay kadalasang ginagamit. Ang mga ito ay medyo mura, na mahalaga para sa mga organisasyon ng badyet. at medyo simple. Ang pinakakaraniwan ay ang paraan ng biuret. Ang kakanyahan ng pamamaraan: ang mga protina sa isang alkalina na kapaligiran ay tumutugon sa tansong sulpate at bumubuo ng mga lilang compound. Ang nilalaman ng protina sa dugo ay tinutukoy ng saturation ng paglamlam. Ang biomaterial para sa pagsusuri ay kinukuha sa umaga nang walang laman ang tiyan.
Ang pagsusuri ay lubos na tumpak, ngunit may mga salik na nakakaapekto sa konsentrasyon ng protina sa dugo:
- pisikal na aktibidad ilang sandali bago ang biomaterial sampling;
- mga huling linggo ng pagbubuntis at paggagatas;
- ang paggamit ng mga gamot na Corticotropin, Miscleron, Clofibrate ay nagpapataas ng nilalaman ng protina sa dugo, at ang paggamit ng Pyrazinamide at estrogen - upang mabawasan ang konsentrasyon;
- maling posisyon ng kamay sa panahon ng biomaterial sampling.
Pagpapasiya ng bakal
Ang dami ng bakal sa dugo ay isa sa mga pangunahing tagapagpahiwatig sa pagsusuri ng iba't ibang sakit. Ang sangkap ay puro sa hemoglobin, na nagsisiguro sa transportasyon ng oxygen sa mga tisyu. Para sapagpapasiya ng bakal sa pamamagitan ng pamamaraang colorimetric, kadalasan, ang isang solusyon ng bathophenanthroline (0.02%) ay ginagamit bilang pangunahing reagent. Biomaterial - serum na walang bakas ng hemolysis.
Ang kakanyahan ng pamamaraan: ang pakikipag-ugnayan ng mga ferrous ions at sulfated bathophenanthroline ay bumubuo ng isang colored complex, ang saturation na kung saan ay tinutukoy ng photometrically. Upang makakuha ng isang malinaw na solusyon, kinakailangang sundin ang mga patakaran para sa pag-sample ng biomaterial, ngunit upang tumpak na matukoy ang optical densities ng iron-ligand complexes, ang iron ay inilabas mula sa hemoglobin gamit ang hydroxylamine at detergents (sodium dodecyl sulfate). Tinutukoy ng resulta ng pagsubok ang presensya at antas ng patolohiya. Ang normal na konsentrasyon ng bakal ay dapat na:
- 14, 2 – 26.0 µmol/L (lalaki);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (mga babae).
Karaniwang nauugnay ang kakulangan sa iron sa pagkawala ng dugo, hindi sapat na pagkain, o mahinang pagsipsip mula sa gastrointestinal tract.
Cholesterol test
Ang Cholesterol ay isang organic substance na matatagpuan sa cell wall ng maraming organismo, kabilang ang mga tao. Ito ay kinakailangan para sa produksyon ng cholecalciferol at steroid hormones. Ang antas ng kolesterol na 3.37-5.2 mmol/L ay itinuturing na normal. Ang mataas na nilalaman ay isa sa mga pangunahing sanhi ng atherosclerosis.
Ang Colorimetric na pamamaraan para sa pagtukoy ng kolesterol ay nagbibigay-daan sa iyong makilala ang mga sakit sa vascular sa maagang yugto. Ayon sa pathoanatomical na mga resulta sa nakamamatay na kinalabasan ng ischemia, ang konsentrasyon ng lipophilic alcohol sa mga pasyenteay 6.5-7.8 mmol/L.
Ang prinsipyo ng pamamaraang colorimetric ay ang kolesterol ay na-oxidize ng 3beta-hydroxy-steroid oxidoreductase, na naglalabas ng hydrogen peroxide, na nagpapalit ng p-aminoatipyrine sa isang may kulay na tambalan. Ang nilalaman ng kolesterol ay tinutukoy ng saturation ng kulay nito.
Kapag nagsasagawa ng pagsusuri sa isang bata, dapat isaalang-alang na ang konsentrasyon ng kolesterol sa pagkabata ay hindi dapat lumampas sa 4.1 mmol / l.
Ano ang enzymatic colorimetric method?
Ang mga pagsusuri sa enzymatic ay batay sa paggamit ng mga reaksyon ng mga enzyme na may mataas na aktibidad. Malawakang ginagamit ang mga ito sa analytical chemistry para matukoy ang iba't ibang substance - mula sa nitrate ions hanggang macromolecules.
Enzymatic (enzymatic) na mga pamamaraan ay tiyak, na nagpapahintulot sa pagsusuri ng ilang mga sangkap sa pagkakaroon ng iba pang mga sangkap na katulad ng komposisyon. Ang pinakakaraniwang pamamaraan batay sa paggamit ng enzyme - glucose oxidase. Ang pagsusulit ay ginagamit upang matukoy ang konsentrasyon ng glucose sa dugo. Ang katumpakan ng pagsusuri ay nagpapahintulot na magamit ito upang ayusin ang dosis ng mga hypoglycemic agent sa mga pasyenteng may type 2 diabetes.
Ang Glucose oxidant method ay itinuturing na isa sa mga pinakamahusay na quantitative method para sa pagtukoy ng glucose. Parehong maaaring gamitin ang dugo (capillary) at serum bilang isang biomaterial, ngunit mas pinipili ang plasma dahil mayroon itong mas mababang hematocrit na nilalaman, na negatibong nakakaapekto sa katumpakan ng resulta.
Ang kinetic na paraan ng photometry ay pangunahing ginagamit. Ang kakanyahan nito ay nakasalalay sa katotohanang iyonang itinatag na ratio ng glucose oxidase at peroxidase, para sa isang tiyak na tagal ng oras pagkatapos ng pagsisimula ng reaksyon, ang rate ng pagbuo ng isang may kulay na tambalan ay magiging katumbas ng antas ng glucose sa sample. Ang pangunahing bentahe ng pagsubok ay ang resulta ay hindi apektado ng pagkakaroon ng mga third-party na compound sa sample. Ang pamamaraan ay mayroon ding disbentaha - ang mga mamahaling instrumento sa pagsukat mula sa mga tagagawa ng German o Swedish ay kinakailangan para sa pagsubok.
Konklusyon
Ang colorimetric na paraan ay tumpak at madaling gamitin. Ang paggamit nito sa gamot ay nagbibigay-daan sa maagang pagtuklas ng iba't ibang mga pathological na pagbabago sa katawan. Sa pagpapakilala ng mga bagong teknolohiya, ang pamamaraan ay pinagbubuti at nagiging mas popular.
