Kamakailan, isang maaasahan, napakasensitibo at mabilis na paraan para sa pag-diagnose ng iba't ibang mga nakakahawang sakit ng tao ay binuo. Ang pamamaraang ito ay tinatawag na "PCR analysis". Ano ito, ano ang kakanyahan nito, anong mga microorganism ang maihahayag nito at kung paano ito dadalhin nang tama, sasabihin namin sa aming artikulo.
Kasaysayan ng pagtuklas
Inimbento ang paraan ng polymerase chain reaction (PCR) ng American scientist na si Kary Mullis noong 1983. Noong una, ang diagnostic method ay na-patent ng Cetus Corporation, kung saan nagtrabaho ang lumikha nito. Ngunit noong 1992, ang lahat ng mga karapatan at patent ay naibenta sa Hoffman-La Roche. Pagkatapos nito, lumabas na ang mga katulad na pag-aaral ay isinagawa nang magkatulad at naitala ng iba pang mga biologist sa Amerika, tulad nina Alice Chen, David Edgar, John Trell. Noong 1980, ang mga siyentipikong Sobyet na sina A. Slyusarenko, A. Kaledin at S. Gorodetsky ay humarap din sa problemang ito. Samakatuwid, imposibleng matukoy ang nag-iisang may-ari ng copyright. Maraming mga kilalang biochemist ang gumawa ng isang tiyak na kontribusyon sa pagbuo ng polymerase chain reaction technique at na-patent ang kanilang mga inobasyon. Sa kasalukuyan, ang pagsusuriIsinasagawa ang PCR saanman sa mga espesyal na kagamitang laboratoryo.
Ang esensya ng PCR diagnostic method
PCR analysis: ano ito at paano ito gumagana? Ang kakanyahan ng pamamaraan ay upang madagdagan ang dami ng isang tiyak na microbial na kapaligiran sa ilalim ng mga artipisyal na kondisyon gamit ang isang espesyal na DNA polymerase enzyme. Para dito, ang umiiral na materyal ng DNA ay pinarami ng maraming beses. Kaya, sa pagkakaroon ng pathogenic microorganism sa sample, tataas ang halaga nito dahil sa biochemical laboratory manipulations, at hindi magiging mahirap na tuklasin ang bacterium sa ilalim ng mikroskopyo.
Paano ginagawa ang materyal na pananaliksik?
Kinakailangan para sa pagsusuri:
- DNA matrix;
- primer na nagdudugtong sa mga dulo ng isang piraso ng materyal;
- init-resistant DNA polymerase enzyme;
- mga kemikal na nagpapagana ng maayos ng mga enzyme;
- buffer solution na kinakailangan upang lumikha ng naaangkop na mga kondisyon para sa paglaki at pagbuo ng materyal ng DNA.
Upang magsagawa ng PCR, 25-30 repetitions ang ginagawa, na binubuo ng tatlong yugto: denaturation, annealing at elongation.
Para sa pagsusuri ng polymer chain reaction, isang espesyal na aparato ang ginagamit - isang amplifier. Nagbibigay-daan sa iyo ang mga modernong kagamitan na itakda ang kinakailangang programa para sa pagpainit at pagpapalamig ng mga tubo upang maalis ang mga error sa panahon ng diagnostic.
Saan ginagamit ang mga diagnostic?
Ang polymer chain reaction method ay ginagamit sa iba't ibang larangan ng medisina:
- kriminalista na maykinikilala nito ang genetic material gaya ng buhok, laway o dugo;
- Tumutulong ang pagsusuri sa dugo ng PCR sa genotyping, halimbawa, upang matukoy ang isang indibidwal na genetically inherent na reaksyon sa isang partikular na gamot;
- gamit ang paraang ito para itatag ang pagkakaroon ng ugnayan ng pamilya sa pagitan ng mga tao;
- Ang pinakasikat na paraan ng PCR ay naging sa mga medikal na diagnostic upang matukoy ang iba't ibang mga nakakahawang sakit.
Anong mga impeksiyon ang nakikita ng PCR?
Kaya, matagal at matagumpay na ginagamit ng gamot ang PCR analysis. Kung ano ito, alam na natin. At anong mga pathogen ang maaaring makita kasama nito? Ang mga sumusunod na nakakahawang sakit ay nasuri sa pamamagitan ng PCR method:
- hepatitis A, B, C;
- ureaplasmosis;
- candidiasis;
- chlamydia;
- mycoplasmosis;
- gardnerellosis;
- nakakahawang mononucleosis;
- trichomoniasis;
- papillomavirus infection;
- tuberculosis;
- mga uri ng impeksyon sa herpes 1 at 2;
- helicobacteriosis;
- cytomegalovirus;
- diphtheria;
- salmonellosis;
- impeksyon sa HIV.
Gayundin, ginagamit ang mga paraan ng PCR sa pag-diagnose ng cancer.
Mga benepisyo sa pamamaraan
Ang mga diagnostic ng PCR ay may ilang mga pakinabang:
- Mataas na sensitivity. Kahit na sa pagkakaroon lamang ng ilang mga molekula ng microorganism DNA, tinutukoy ng pagsusuri ng PCR ang pagkakaroon ng impeksiyon. Ang pamamaraan ay makakatulong sa mga talamak at latently na nagaganap na mga sakit. Kadalasan sa mga ganitong kaso, ang mikroorganismoay kung hindi man ay hindi nalilinang.
- Anumang materyal ay angkop para sa pananaliksik, tulad ng laway, dugo, pagtatago ng ari, buhok, mga epithelial cell. Ang pinakakaraniwan ay ang pagsusuri ng dugo at urogenital smear para sa PCR.
- Walang pangmatagalang pag-crop ang kailangan. Nagbibigay-daan sa iyo ang awtomatikong proseso ng diagnostic na makuha ang mga resulta ng pag-aaral pagkatapos ng 4-5 na oras.
- Ang pamamaraan ay halos 100% maaasahan. Tanging mga nakahiwalay na kaso ng mga maling negatibong resulta ang naitala.
- Ang kakayahang tumukoy ng ilang uri ng pathogens mula sa isang sample ng materyal. Ito ay hindi lamang nagpapabilis sa proseso ng pag-diagnose ng sakit, ngunit makabuluhang binabawasan ang mga gastos sa materyal. Kadalasan ang doktor ay nagrereseta ng isang komprehensibong pagsusuri sa PCR. Ang presyo ng pagsusuri, na binubuo ng pagtukoy ng anim na pathogens, ay humigit-kumulang 1,500 rubles.
Mga rekomendasyon para sa paghahanda para sa pagsusuri
Upang maging mapagkakatiwalaan ang mga resulta sa panahon ng pag-aaral ng PCR, kailangan mong kumuha ng pagsusulit, kasunod ng mga rekomendasyon para sa paunang paghahanda para sa diagnosis:
- Bago mag-donate ng laway, dapat kang umiwas sa pagkain at pag-inom ng mga gamot 4 na oras bago mag-sample. Kaagad bago ang pamamaraan, banlawan ang iyong bibig ng pinakuluang tubig.
- Ang mga tuntunin sa itaas ay dapat ding sundin kapag kumukuha ng sample mula sa panloob na ibabaw ng pisngi. Pagkatapos banlawan, inirerekomendang magsagawa ng magaan na masahe sa balat upang i-highlight ang pagtatago ng glandula.
- Ang ihi ay karaniwang kinokolekta sa bahay. Upang gawin ito, kailangan mong magsagawa ng masusing banyoari. Kolektahin ang 50-60 ML ng ihi sa isang sterile plastic container. Upang matiyak ang kadalisayan ng materyal, inirerekomenda para sa mga kababaihan na magpasok ng isang tampon sa puki, at para sa mga lalaki na hilahin pabalik ang fold ng balat hangga't maaari. Huwag mag-donate sa panahon ng iyong regla.
- Upang mag-donate ng sperm, kailangan mong umiwas sa pakikipagtalik sa loob ng 3 araw bago mag-sample. Pinapayuhan din ng mga doktor na huwag pumunta sa sauna at maligo ng mainit, uminom ng alak at maanghang na pagkain. Dapat mong pigilin ang pag-ihi 3 oras bago ang pagsusulit.
- Upang kumuha ng urogenital smear, halimbawa, kung ang PCR test ay ginawa para sa chlamydia, ang mga babae at lalaki ay pinapayuhan na magkaroon ng sexual rest sa loob ng 3 araw. Ang mga antibacterial na gamot ay hindi dapat inumin 2 linggo bago ang pagsusuri. Para sa isang linggo, kailangan mong ihinto ang paggamit ng mga intimate gels, ointment, vaginal suppositories, douching. 3 oras bago ang pagsusuri, dapat mong pigilin ang pag-ihi. Sa panahon ng regla, hindi isinasagawa ang sampling, 3 araw lamang pagkatapos ng pagtigil ng paglabas ng dugo, maaari kang kumuha ng urogenital smear.
PCR sa panahon ng pagbubuntis
Sa panahon ng pag-asa ng sanggol, maraming mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik ay lubhang mapanganib para sa normal na pag-unlad ng fetus. Ang mga STD ay maaaring makapukaw ng intrauterine growth retardation, miscarriage o premature birth, congenital malformations ng bata. Samakatuwid, napakahalaga na sumailalim sa pagsusuri sa PCR sa maagang pagbubuntis. Kinakailangang ipasa ang pagsusuri sa pagpaparehistro - hanggang 12 linggo.
Ang materyal ay kinuha mula sa cervical canal gamit ang isang espesyal na brush. Ang pamamaraan ay walang sakit at hindi nagdudulot ng panganib sa sanggol. Karaniwan sa panahon ng pagbubuntis, ang isang pagsusuri ay isinasagawa para sa chlamydia sa pamamagitan ng paraan ng PCR, pati na rin para sa ureaplasmosis, mycoplasmosis, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. Ang ganitong kumplikadong mga pagsusuri ay tinatawag na PCR-6.
PCR para sa diagnosis ng HIV
Dahil sa katotohanan na ang polymerase chain reaction method ay napakasensitibo sa mga pagbabago sa katawan at sa mga kondisyon ng diagnosis, maraming mga kadahilanan ang maaaring makaapekto sa resulta. Samakatuwid, ang pagsusuri ng PCR para sa impeksyon sa HIV ay hindi isang maaasahang paraan, ang kahusayan nito ay 96-98%. Sa natitirang 2-4% ng mga kaso, ang pagsusuri ay nagbibigay ng mga maling positibong resulta.
Ngunit sa ilang sitwasyon, kailangang-kailangan ang HIV PCR diagnostics. Karaniwan itong ibinibigay sa mga taong may false-negative na resulta ng ELISA. Ang ganitong mga tagapagpahiwatig ay nagpapahiwatig na ang isang tao ay hindi pa nakakabuo ng mga antibodies sa virus at hindi sila maaaring makita nang walang maraming pagtaas sa bilang. Ito mismo ang maaaring makamit sa pamamagitan ng pagsasagawa ng PCR blood test.
Ang mga diagnostic na ito ay kailangan din para sa mga bata sa unang taon ng buhay na ipinanganak mula sa isang ina na may HIV. Ang pamamaraan ay ang tanging paraan upang mapagkakatiwalaang matukoy ang katayuan ng isang bata.
PCR para sa pag-diagnose ng hepatitis
Ang paraan ng polymerase chain reaction ay nagbibigay-daan sa pag-detect ng DNA ng hepatitis A, B, C virus bago pa ang pagbuo ng mga antibodies sa impeksyon o ang pagsisimula ng mga sintomas ng sakit. Ang pagsusuri ng PCR para sa hepatitis C ay lalong epektibo, dahil sa 85% ng mga kaso ang sakit na ito ay walang sintomas at walangAng napapanahong paggamot ay pumapasok sa talamak na yugto.
Ang napapanahong pagtuklas ng pathogen ay makakatulong na maiwasan ang mga komplikasyon at pangmatagalang paggamot.
Komprehensibong pagsusuri sa PCR
Complex PCR analysis: ano ito? Isa itong pagsusuri gamit ang polymeric chain reaction method, na kinabibilangan ng pagtukoy ng ilang uri ng impeksyon nang sabay-sabay: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes type 1 at 2, gonorrhea, papillomavirus. Ang presyo ng naturang mga diagnostic ay mula 2000 hanggang 3500 rubles. depende sa klinika, mga materyales at kagamitan na ginamit, pati na rin sa uri ng pagsusuri: husay o dami. Ano ang kinakailangan sa iyong kaso - ang doktor ang magpapasya. Sa ilang mga kaso, sapat na upang matukoy ang pagkakaroon ng pathogen, sa iba, halimbawa, na may impeksyon sa HIV, ang isang quantitative titer ay gumaganap ng isang mahalagang papel. Kapag na-diagnose ang lahat ng pathogens sa itaas, ang pagsusuri ay tinatawag na "PCR-12 analysis".
Transcript ng mga resulta ng pagsusuri
Ang pag-decipher sa pagsusuri ng PCR ay hindi mahirap. Mayroon lamang 2 mga kaliskis ng tagapagpahiwatig - "positibong resulta" at "negatibong resulta". Kapag may nakitang pathogen, maaaring kumpirmahin ng mga doktor ang pagkakaroon ng sakit na may 99% na katiyakan at simulan ang paggamot sa pasyente. Sa pamamagitan ng isang quantitative na paraan para sa pagtukoy ng impeksyon, ang kaukulang column ay magsasaad ng numerical indicator ng nakitang bacteria. Ang isang doktor lamang ang maaaring matukoy ang lawak ng sakit at magreseta ng kinakailangang paggamot.
Sa ilang mga kaso, halimbawa, kapag tinutukoy ang impeksyon sa HIV sa pamamagitan ng PCR, na may negatibong resulta, kinakailangan na magsagawa ng karagdagang pagsusuri upang kumpirmahin ang mga nakuhang indicator.
Saan magpapasuri?
Saan kukuha ng PCR test: sa pampublikong klinika o sa pribadong laboratoryo? Sa kasamaang palad, sa mga munisipal na institusyong medikal, ang mga kagamitan at pamamaraan ay madalas na hindi napapanahon. Samakatuwid, mas mahusay na bigyan ng kagustuhan ang mga pribadong laboratoryo na may modernong kagamitan at mataas na kwalipikadong tauhan. Bilang karagdagan, sa isang pribadong klinika, mas mabilis kang makakakuha ng mga resulta.
Sa Moscow, maraming pribadong laboratoryo ang nag-aalok ng PCR analysis para sa iba't ibang impeksyon. Halimbawa, sa mga naturang klinika tulad ng Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, isinasagawa ang pagsusuri ng PCR. Ang presyo ng pagsusuri ay mula sa 200 rubles. para sa pagtukoy ng isang pathogen.
Maaaring mahihinuha na ang diagnosis ng mga nakakahawang sakit sa pamamagitan ng PCR sa karamihan ng mga kaso ay isang mabilis at maaasahang paraan upang matukoy ang pathogen sa katawan sa mga unang yugto ng impeksiyon. Ngunit gayon pa man, sa ilang mga kaso, ito ay nagkakahalaga ng pagpili ng iba pang mga pamamaraan ng diagnostic. Ang isang espesyalista lamang ang maaaring matukoy ang pangangailangan para sa naturang pag-aaral. Ang pag-decipher sa pagsusuri ng PCR ay nangangailangan din ng isang propesyonal na diskarte. Sundin ang payo ng iyong doktor at huwag kumuha ng mga pagsusulit na hindi mo kailangan.
